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Qubit檢測中遇到的問題查缺補漏

更新時間:2024-10-24      點擊次數(shù):724

您在Qubit檢測中遇到了除“標(biāo)準(zhǔn)品錯誤"以外的其它試劑盒相關(guān)問題。

這里有一些建議,不知對您是否有幫助,一起看看吧
1.在“查看標(biāo)準(zhǔn)品"或"查看校準(zhǔn)"下查看標(biāo)準(zhǔn)品的原始熒光值(RFU)。確認(rèn)樣本的熒光值落在標(biāo)準(zhǔn)品的熒光值之間(或稍稍高于最高的標(biāo)準(zhǔn)品)。如果不是,那么樣本已經(jīng)超過了檢測的精確范圍。請參看產(chǎn)品目錄中的各個檢測試劑盒的置信區(qū)間。如果檢測樣本超過了置信區(qū)間,那么檢測讀數(shù)將是2位有效數(shù)字而不是3位。 要使樣本進(jìn)入準(zhǔn)確測定范圍,可稀釋樣本或使用更多或更少體積的樣本(例如,如果樣本讀值較低的話,使用10 µL而非2 µL)。
2.檢查溫度因素。檢測是溫度敏感性的,熒光信號在較高溫度時會減弱。樣本之間或樣本和標(biāo)準(zhǔn)品之間的溫度波動可能引發(fā)問題。
確保緩沖液和保存在DMSO內(nèi)的Qubit試劑處于室溫。緩沖液和Qubit試劑應(yīng)保存于室溫,而不是冰箱內(nèi)。保存于 4°C的緩沖液即使在室溫放置2–3小時仍然不能達(dá)到室溫。
確保你的樣本和工作溶液不能過熱(包括剛從離心機(jī)取出時)。保留在Qubit儀器內(nèi)過久或多次讀取的樣本可能會升溫。如果你想對一個試管多次讀數(shù),你應(yīng)該將它從儀器內(nèi)取出,放置30秒以平衡至室溫,然后進(jìn)行下一次讀數(shù)。另外,在讀數(shù)之前,不要將試管握在手中過長時間,因為這會加熱樣本,使讀數(shù)變低。
3.確保正確制備Qubit工作溶液(使用試劑盒內(nèi)的緩沖液1:200稀釋)。確保正確制備標(biāo)準(zhǔn)品(10 µL標(biāo)準(zhǔn)品加入到190 µL工作溶液中)。確保試管中加入至少200µL液體(對于標(biāo)準(zhǔn)品和樣本均是如此)。
4.確保你使用的試劑和標(biāo)準(zhǔn)品是6個月之內(nèi)的,并且標(biāo)準(zhǔn)品保存方法正確。Qubit試劑存儲溶液應(yīng)盡可能避光保存。
5.確保在Qubit熒光計上選擇的程序跟你所用的Qubit檢測試劑盒是匹配的。
6.讀取標(biāo)準(zhǔn)品和樣本數(shù)值時,確保儀器的蓋子關(guān)閉。
7.使用推薦的檢測管(檢測管不能阻擋儀器蓋上蓋子,并且檢測管應(yīng)當(dāng)光學(xué)透明)。某些類型的檢測管可能有較高的自發(fā)熒光而影響檢測。
8.你在Qubit儀器中輸入你所加入到工作溶液中的存儲液的微升數(shù)了嗎?如果輸入了,那么Qubit熒光計獲得此信息后給出的濃度是你的存儲液的濃度。如果沒有輸入,那么你得到的濃度是檢測試管(你放入Qubit熒光計的試管)內(nèi)的濃度——不是你的存儲液濃度。
9.如果你是將Qubit檢測的結(jié)果和使用UV吸光值獲得的濃度進(jìn)行比較,并且基于UV吸光值的濃度顯著較高,那么可能是因為核酸或蛋白污染。Qubit檢測試劑對于DNA, RNA和蛋白的檢測特異性比吸光值測定法高得多。

 


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